1.       一种维药组合物，其特征在于原料按重量份计包括神香草10份至50份，香青兰10份至50份,按下述方法得到：第一步，将所需量的神香草和香青兰混合，加水回流提取并过滤，分别得到一次滤液和一次药渣；第二步，将一次药渣加水回流提取并过滤，分别得到二次滤液和二次药渣；第三步，再将二次药渣加入乙醇放置后，回收二次药渣中的乙醇并过滤，得到三次滤液；第四步，合并一次滤液、二次滤液和三次滤液，得到混合滤液，将混合滤液浓缩至浸膏后得到维药组合物。

2.       根据权利要求1所述的维药组合物，其特征在于第一步中，加入神香草和香青兰总重量的8倍至12倍量的水回流提取1.8h至2.2h。

3.       根据权利要求1或2所述的维药组合物，其特征在于第二步中，加入神香草和香青兰总重量的6倍至10倍量的水回流提取0.8h至1.2h。

4.       根据权利要求1或2或3所述的维药组合物，其特征在于第三步中，加入神香草和香青兰总重量的4倍量的乙醇，放置时间为10h至14h，其中，乙醇的质量百分数为70％至90％。

5.       一种维药组合物的制备方法，其特征在于按下述方法进行：第一步，将所需量的神香草和香青兰混合，加水回流提取并过滤，分别得到一次滤液和一次药渣；第二步，将一次药渣加水回流提取并过滤，分别得到二次滤液和二次药渣；第三步，再将二次药渣加入乙醇放置后，回收二次药渣中的乙醇并过滤，得到三次滤液；第四步，合并一次滤液、二次滤液和三次滤液，得到混合滤液，将混合滤液浓缩至浸膏后得到维药组合物。

6.       根据权利要求5所述的维药组合物的制备方法，其特征在于第一步中，加入神香草和香青兰总重量的8倍至12倍量的水回流提取1.8h至2.2h。

7.       根据权利要求5或6所述的维药组合物的制备方法，其特征在于第二步中，加入神香草和香青兰总重量的6倍至10倍量的水回流提取0.8h至1.2h。

8.       根据权利要求5或6或7所述的维药组合物的制备方法，其特征在于第三步中，加入神香草和香青兰总重量的4倍量的乙醇，放置时间为10h至14h，其中，乙醇的质量百分数为70％至90％。

9.       一种根据权利要求1至4所述的维药组合物在制备治疗缺血性脑卒中疾病药物中的应用。

说明

[0001]　本发明涉及维药组合物制备技术领域，是一种维药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

[0002]　脑缺血性脑卒中疾病属于中医学"中风"范畴，因发病率、复发率、死亡率较高，是全球致残、致死数百万人的主要原因之一。研究报道我国缺血性脑卒中发病和死亡率均高于世界水平且逐年递增，2017年脑血管病占我国居民疾病死亡比例20％以上，目前，通过血栓溶解疗法恢复缺血区域组织的血液灌注是最有效的治疗方法，但是具有较高的出血等并发症，因此，了解缺血性脑卒中具体的发病过程是为发现新的和更有效的疗法和药物提供依据，同时，如何缓解脑缺血再灌注损伤是提高缺血性脑卒中疗效的关键之一。

[0003]　维吾尔医作为我国传统医学重要的一部分，在疾病的防治中起关键的作用，中医药具有拮抗脑缺血再灌注炎症反应，减轻氧化应激损伤等作用，中医药制剂因具有较高的安全性和较高的的神经功能保护作用，是目前缺血性脑卒中疾病神经保护研究的热点。神香草

[0004](Hyssopus cuspidatus Boriss.)和香青兰(Dracocephalum moldovia L)作为维吾尔医常用药材，多用于治疗异常粘液质性疾病，气道炎症疾病和心血管疾病，具有抗氧化，抗炎，抗血栓，舒张血管的作用。神香草和香青兰经过维吾尔医长期的临床实践，具有较高的安全性。目前，将神香草和香青兰结合制备治疗脑缺血性脑卒中疾病的药物尚未见报道。

发明内容

[0005]　本发明提供了一种维药组合物及其制备方法和应用，克服了上述现有技术之不足，其能有效避免现有技术血栓溶解疗法中作为治疗脑缺血性脑卒中疾病的溶栓药物引起的出血等并发症的问题。

[0006]　本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种维药组合物，原料按重量份计包括神香草10份至50份，香青兰10份至50份，按下述方法得到：第一步，将所需量的神香草和香青兰混合，加水回流提取并过滤，分别得到一次滤液和一次药渣；第二步，将一次药渣加水回流提取并过滤，分别得到二次滤液和二次药渣；第三步，再将二次药渣加入乙醇放置后，回收二次药渣中的乙醇并过滤，得到三次滤液；第四步，合并一次滤液、二次滤液和三次滤液，得到混合滤液，将混合滤液浓缩至浸膏后得到维药组合物。

[0007]　下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：

[0008]　上述第一步中，加入神香草和香青兰总重量的8倍至12倍量的水回流提取1.8h至2.2h。

[0009]　上述第二步中，加入神香草和香青兰总重量的6倍至10倍量的水回流提取0.8h至1.2h。

[0010]　上述第三步中，加入神香草和香青兰总重量的4倍量的乙醇，放置时间为10h至14h，其中，乙醇的质量百分数为70％至90％。

[0011]　本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种维药组合物的制备方法，按下述方法进行：第一步，将所需量的神香草和香青兰混合，加水回流提取并过滤，分别得到一次滤液和一次药渣；第二步，将一次药渣加水回流提取并过滤，分别得到二次滤液和二次药渣；

[0012]　第三步，再将二次药渣加入乙醇放置后，回收二次药渣中的乙醇并过滤，得到三次滤液；第四步，合并一次滤液、二次滤液和三次滤液，得到混合滤液，将混合滤液浓缩至浸膏后得到维药组合物。

[0013]　下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：

[0014]　上述第一步中，加入神香草和香青兰总重量的8倍至12倍量的水回流提取1.8h至2.2h。

[0015]　上述第二步中，加入神香草和香青兰总重量的6倍至10倍量的水回流提取0.8h至1.2h。

[0016]　上述第三步中，加入神香草和香青兰总重量的4倍量的乙醇，放置时间为10h至14h，其中，乙醇的质量百分数为70％至90％。

[0017]　本发明的技术方案之三是通过以下措施来实现的：一种维药组合物在制备治疗缺血性脑卒中疾病药物中的应用。

[0018]　本发明维药组合物不仅能有效降低脑缺血再灌注大鼠的神经功能丧失评分和脑梗死面积，还能起到减轻氧化应激损伤和抑制炎症反应的作用，同时，能减轻神经细胞病理学损伤，具有神经保护作用，从而缓解了脑缺血再灌注损伤，对脑缺血性脑卒中具有较好的疗效，本发明维药组合物能有效避免现有技术血栓溶解疗法中作为治疗脑缺血性脑卒中疾病的溶栓药物引起的出血等并发症的问题，并且制备工艺简单，有利于推广和应用。

附图说明

[0019]　图1a为脑缺血再灌注大鼠经TTC染色的脑组织梗死面积图。

[0020]　图2a为脑缺血再灌注大鼠脑组织海马区病理变化图。

具体实施方式

[0021]　本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。本发明中所提到各种化学试剂和化学用品如无特殊说明，均为现有技术中公知公用的化学试剂和化学用品；本发明中的百分数如没有特殊说明，均为质量百分数；本发明中的溶液若没有特殊说明，均为溶剂为水的水溶液，例如，盐酸溶液即为盐酸水溶液；本发明中的常温、室温一般指15℃到25℃的温度，一般定义为25℃。

[0022]　下面结合实施例对本发明作进一步描述：

[0023]　实施例1：该维药组合物，原料按重量份计包括神香草10份至50份，香青兰10份至50份，按下述方法得到：第一步，将所需量的神香草和香青兰混合，加水回流提取并过滤，分别得到一次滤液和一次药渣；第二步，将一次药渣加水回流提取并过滤，分别得到二次滤液和二次药渣；第三步，再将二次药渣加入乙醇放置后，回收二次药渣中的乙醇并过滤，得到三次滤液；第四步，合并一次滤液、二次滤液和三次滤液，得到混合滤液，将混合滤液浓缩至浸膏后得到维药组合物。

[0024]　实施例2：该维药组合物，原料按重量份计包括神香草10份或50份，香青兰10份或50份，按下述方法得到：第一步，将所需量的神香草和香青兰混合，加水回流提取并过滤，分别得到一次滤液和一次药渣；第二步，将一次药渣加水回流提取并过滤，分别得到二次滤液和二次药渣；第三步，再将二次药渣加入乙醇放置后，回收二次药渣中的乙醇并过滤，得到三次滤液；第四步，合并一次滤液、二次滤液和三次滤液，得到混合滤液，将混合滤液浓缩至浸膏后得到维药组合物。

[0025]　实施例3：作为上述实施例的优化，第一步中，加入神香草和香青兰总重量的8倍至12倍量的水回流提取1.8h至2.2h。

[0026]　实施例4：作为上述实施例的优化，第二步中，加入神香草和香青兰总重量的6倍至10倍量的水回流提取0.8h至1.2h。

[0027]　实施例5：作为上述实施例的优化，第三步中，加入神香草和香青兰总重量的4倍量的乙醇，放置时间为10h至14h，其中，乙醇的质量百分数为70％至90％。

[0028]　实施例6：该维药组合物，原料按重量份计包括神香草10份，香青兰10份，按下述方法得到：第一步，将10份的神香草和10份的香青兰混合，加入神香草和香青兰总重量的8倍量的水回流提取1.8h并过滤，分别得到一次滤液和一次药渣；第二步，将一次药渣加入神香草和香青兰总重量的6倍量的水回流提取0.8h并过滤，分别得到二次滤液和二次药渣；第三步，再将二次药渣加入神香草和香青兰总重量的4倍量的乙醇放置10h后，回收二次药渣中的乙醇并过滤，得到三次滤液，其中，乙醇的质量百分数为70％；第四步，合并一次滤液、二次滤液和三次滤液，得到混合滤液，将混合滤液浓缩至浸膏后得到维药组合物。

[0029]　实施例7：该维药组合物，原料按重量份计包括神香草50份，香青兰50份，按下述方法得到：第一步，将50份的神香草和50份的香青兰混合，加入神香草和香青兰总重量的12倍量的水回流提取2.2h并过滤，分别得到一次滤液和一次药渣；第二步，将一次药渣加入神香草和香青兰总重量的10倍量的水回流提取1.2h并过滤，分别得到二次滤液和二次药渣；第三步，再将二次药渣加入神香草和香青兰总重量的4倍量的乙醇放置14h后，回收二次药渣中的乙醇并过滤，得到三次滤液，其中，乙醇的质量百分数为80％；第四步，合并一次滤液、二次滤液和三次滤液，得到混合滤液，将混合滤液浓缩至浸膏后得到维药组合物。

[0030]　实施例8：该维药组合物，原料按重量份计包括神香草25份，香青兰25份，按下述方法得到：第一步，将25份的神香草和25份的香青兰混合，加入神香草和香青兰总重量的10倍量的水回流提取2.0h并过滤，分别得到一次滤液和一次药渣；第二步，将一次药渣加入神香草和香青兰总重量的8倍量的水回流提取1.0h并过滤，分别得到二次滤液和二次药渣；第三步，再将二次药渣加入神香草和香青兰总重量的4倍量的乙醇放置12h后，回收二次药渣中的乙醇并过滤，得到三次滤液，其中，乙醇的质量百分数为90％；第四步，合并一次滤液、二次滤液和三次滤液，得到混合滤液，将混合滤液浓缩至浸膏后得到维药组合物。

[0031]　以下为本发明实施例8制备得到的维药组合物对大鼠脑缺血再灌注损伤治疗作用的考察。

[0032]　药理试验

[0033]　1.脑缺血再灌注模型大鼠的建立

[0034]　试验动物：采用健康清洁级雄性SD大鼠，饲养于复旦大学上海医学院实验动物中心，饲养条件：清洁级，光照时间固定，水、食物自由摄取。

[0035]　分组和给药：将大鼠随机分组，每组18只，分别为对照组(假手术组)、模型组和给药组，其中，给药组将本发明实施例8制备的维药组合物加入蒸馏水稀释至浓度为2g/ml,给予剂量为4g/kg，给药方式为灌胃，1次/天；对照组和模型组均给予等量的生理盐水代替，各组分别给药7天后，制备脑缺血再灌注模型，在缺血再灌注24h后进行检测。

[0036]　脑缺血再灌注模型建立方法：在第七天给药1h后，将大鼠用10％水合氯醛腹腔注射进行麻醉，麻醉后仰卧固定于手术台上，在颈部正中偏左剪口，暴露和分离右侧颈总动脉、右颈外静脉，自右侧颈总动脉远端逆行插管并结扎近心端，将线栓经颈外动脉向颈内动脉插入约18.0mm±2.0mm到达大脑中动脉并阻塞大脑中动脉，缺血30min后，将线栓抽离，确认无出血后用酒精消毒，涂青霉素粉，缝合皮肤。对照组是将线栓插入颈动脉，但不深入到大脑中动脉，其余步骤均相同。

[0037]　线栓可采用由北京西浓生物技术有限公司提供的型号为2838-A4的线栓。

[0038]　2.考察本发明维药组合物对脑缺血再灌注大鼠死亡率、神经功能丧失评分的影响

[0039]　试验方法：将术后再灌注24h后的大鼠进行神经行为学评分(Longa评分法)，评分标准：评0分为无明显损伤，活动正常；1分为右前肢不能完全伸直；2分＝向右侧转圈；3分为向右侧倾斜；4分为不能自发行走，意识丧失；5分为死亡。

[0040]

[0041]　试验结果：各组大鼠死亡率和神经功能丧失评分的比较如表1所示，由表1可知，与对照组大鼠相比，模型组大鼠神经功能丧失评分明显升高；与模型组大鼠相比，给药组大鼠神经功能丧失评分有显著降低的趋势，说明本发明维药组合物能改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能。

[0042]　3.考察本发明维药组合物对脑缺血再灌注大鼠脑梗死面积的影响

[0043]　试验方法：将术后再灌注24h后的大鼠用10％水合氯醛腹腔注射进行麻醉，麻醉后断头取脑，迅速剥取脑组织，放入-20℃低温冰箱中冰冻15min，去掉嗅球、小脑、低位脑干部分，将脑组织连续切成2mm厚的冠状切片，置于37℃、2％TTC磷酸盐缓冲液中避光浸15min，其间翻动1次，以利于脑组织切片双面充分染色，染色后将其取出置于4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液中浸泡30分钟，避光保存并拍照，正常脑组织染色为红色，梗死组织为白色，经图像分析系统分析并计算梗死区面积，求其占总面积的百分比。

[0044]　试验结果：各组大鼠脑梗死面积的比较如图1a和表2所示，其中，图1a中a为对照组，b为模型组，c为给药组；表1中，***表示模型组与对照组比较，P<0.001；△表示给药组与模型组比较，P<0.05，由图1a和表2可知，与对照组大鼠相比，模型组大鼠脑梗死面积明显升高，与模型组大鼠相比，给药组大鼠脑组织梗死面积明显降低，说明本发明维药组合物能有效降低脑缺血再灌注大鼠脑梗死面积。

[0045]　4.考察本发明维药组合物对脑缺血再灌注大鼠脑组织中丙二醛MDA和超氧化物歧化酶SOD含量的影响

[0046]　试验方法：将术后再灌注24h后的大鼠用10％水合氯醛腹腔注射进行麻醉，麻醉后断头取脑，迅速剥取脑组织，取矢状切取左侧脑组织(插线栓侧)脑组织，生理盐水清洗后，按生理盐水(ml)：脑组织(g)＝9：1的比例加入预冷的生理盐水，经碾碎后得到10％的脑匀浆，将脑匀浆在温度为4℃、转速为3000r/min的条件下离心10min，取上清液测定脑组织中丙二醛MDA和超氧化物歧化酶SOD的含量，其中，丙二醛MDA和超氧化物歧化酶SOD含量测定按照试剂盒说明进行，试剂盒可采用由南京建成生物工程研究所提供。

[0047]　试验结果：各组大鼠脑组织中丙二醛MDA和超氧化物歧化酶SOD含量的比较如表2所示，其中，***表示模型组与对照组比较，P<0.001；△表示给药组与模型组比较，P<0.05，△△表示给药组与模型组比较，P<0.01，由表2可知，与对照组大鼠相比，模型组大鼠在脑组织缺血再灌注24h后，脑组织中的丙二醛MDA含量明显升高，超氧化物歧化酶SOD含量显著减少；与模型组大鼠相比，给药组大鼠脑组织中的丙二醛MDA含量明显降低，超氧化物歧化酶SOD含量明显升高，说明本发明维药组合物能起到减轻氧化应激损伤的作用。

[0048]　5.考察本发明维药组合物对脑缺血再灌注大鼠脑组织海马区病理变化的影响

[0049]　试验方法：将术后再灌注24h后的大鼠用10％水合氯醛腹腔注射进行麻醉，麻醉后断头取脑，放入4％多聚甲醛中固定，脑组织灌状切片，常规石蜡包埋，进行HE染色以便观察海马和皮质区病理变化。

[0050]　试验结果：如图2a所示，其中，a为对照组，b为模型组，c为给药组，由图2a可知，对照组显示海马无水肿，神经细胞基本正常，可见个别神经元固缩(如箭头1所示)；模型组显示海马区脑膜高度水肿，血管扩张,邻近的海马区可见个别神经元固缩(如箭头1所示)，染色加深，局部神经纤维空泡化(如箭头2所示)，梗死面积占海马组织的2/3以上；给药组显示海马区有水肿，邻近海马区可见部分神经元固缩梗死面积占海马组织的1/3以上，说明本发明维药组合物具有神经保护作用，能减轻缺血再灌注大鼠引起的神经细胞病理学损伤。

[0051]　6.考察本发明维药组合物对脑缺血再灌注大鼠脑组织中炎症因子IL-6、TNF-a含量的影响

[0052]　试验方法：同试验4的方法，取上清液测定脑组织中炎症因子IL-6、TNF-a的含量，其中，炎症因子IL-6、TNF-a含量测定按照试剂盒说明进行，试剂盒可采用由美国RayBiotech公司提供。

[0053]　试验结果：各组大鼠脑组织中炎症因子IL-6、TNF-a含量的比较如表3所示，其中，**表示模型组与对照组比较，P<0.01，***表示模型组与对照组比较，P<0.001；△表示给药组与模型组比较，P<0.05，由表3可知，与对照组大鼠相比，模型组大鼠脑组织中炎症因子IL-6、TNF-a的含量明显升高；与模型组大鼠相比，给药组大鼠脑组织中炎症因子IL-6、TNF-a的含量明显降低，说明本发明维药组合物对脑缺血再灌注大鼠炎症反应具有抑制作用。

[0054]　综上所述，本发明维药组合物不仅能有效降低脑缺血再灌注大鼠的神经功能丧失评分和脑梗死面积，还能起到减轻氧化应激损伤和抑制炎症反应的作用，同时，能减轻神经细胞病理学损伤，具有神经保护作用，从而缓解了脑缺血再灌注损伤，对脑缺血性脑卒中具有较好的疗效，本发明维药组合物能有效避免现有技术血栓溶解疗法中作为治疗脑缺血性脑卒中疾病的溶栓药物引起的出血等并发症的问题，并且制备工艺简单，有利于推广和应用。

[0055]　以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。

[0056]　表1

[0057]　　组别　　　　存活数(只)　　　死亡率(％)　　　神经功能丧失评分

　　　　对照组　　　18　　　　　　　0　　　　　　　0.00±0.52

　　　　模型组　　　12　　　　　　　33.3　　　　　　3.45±0.52***

　　　　给药组　　　14　　　　　　　22.2　　　　　　2.83±0.57△

[0058]　表2

[0059]　

[0060]　表3

[0061]　　组别　　　　　　　IL-6(pg/ml)　　　　　　TNF-a(pg/ml)

　　　　对照组　　　　　　22.9±6.62　　　　　　　40.4±11.2

　　　　模型组　　　　　　56.5±15.1**　　　　　　74.9±15.2***

　　　　给药组　　　　　　31.9±7.77　　　　　　　52.4±8.79△